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索莱宝丨Western Blot整体解决方案

蛋白电泳 SDS-PAGE原理

SDS是一种阴离子表面活性剂，能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。实验使用过程中，还加入DTT或者巯基乙醇，以打开蛋白间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构。SDS—PAGE最常采用垂直板不连续系统（分离胶与浓缩胶）。

一、样品制备

本公司有多种用于样品制备的组织裂解液，每款裂解液会配备一管蛋白酶抑制剂pmsf。本公司还有多种蛋白酶抑制剂供您使用。

·实验试剂

产品货号 产品名称

R0010 高效RIPA_

R0020 普通RIPA

R0030 非变性组织细胞裂解液

A8260 Aprotinin 蛋白酶抑制剂（抑肽酶）

P8100 Pepstatin A 胃蛋白酶抑制剂

P1260 (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制剂混合物

T8031 Trypsin inhibitor 胰蛋白酶抑制剂

P1260 (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制剂混合物

539133 Protease Inhibitor Cocktail Set VI

539134 Protease Inhibitor Cocktail Set III

PC0030 Lowry法蛋白浓度测定试剂盒

PC0010 Bradford蛋白浓度测定试剂盒>

PC0020 BCA蛋白浓度测定试剂盒

注：本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合于Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法。

·蛋白提取

产品货号 产品名称 说明

R0010 高效RIPA组织/细胞裂解液 在普通RIPA的基础上改进而来,含蛋白酶抑制剂及磷酸 酶抑制剂(配有一支PMSF)

R0020 RIPA组织/细胞裂解液 RIPA经典配方，适于绝大多数蛋白-蛋白相互作用的免 疫实验。组成： 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.(配有一支PMSF) 保存： 4 ºC避光

R0030 非变性组织/细胞裂解液 非变性条件下裂解的蛋白产物最大限度地保留了蛋白 的特性和功能，如抗原-抗体结合或酶学活性，因此 适宜于进行免疫共沉淀。

R0050 核蛋白提取试剂盒

BC3640 全蛋白提取试剂盒

BC3720 植物蛋白提取试剂盒

BC3710 全蛋白提取试剂盒（强）

BC3711 全蛋白提取试剂盒（中）

BC3730 磷酸化蛋白提取试剂盒

BC3740 胞浆蛋白提取试剂盒

蛋白含量测定是以标准蛋白作为对照，根据蛋白浓度不同，吸光值不同而达到定量的目的。有些方法是理解蛋白本身的吸光值（紫外光谱吸收法）来定量，但更多的是用染料对蛋白进行染色，利用染料与蛋白结合显出与原染料及蛋白不同的吸光值来定量的。后一种方法应用更普遍。蛋白定量方法的选择，应该考虑到蛋白结构（标准品选择）、蛋白溶液内干扰物等因素的影响。

·蛋白定量

产品货号 产品名称 组成说明

PC0010 Bradford蛋白浓度测定试剂盒 5×G250染色液 100ml 2-8℃BSA(5 mg/ml) 1ml -20ºC

PBS稀释液 30ml 2-8℃ 干扰物质少， Tris、糖、甘油、 巯基乙醇、氨、EDTA等均不干扰测定。

PC0020 BCA蛋白浓度测定试剂盒 BCA Reagent 100ml 2-8℃Cu Reagent 3.0ml 2-8℃BSA (5 mg/ml) 1ml -20ºCPBS稀释液 30ml 2-8℃ BCA法的显 著优点是不受去垢剂的影响。

PC0030 Lowry法蛋白浓度测定试剂盒 Folin酚甲试剂A 200ml 2-8℃Folin酚甲试剂B 5ml 2-8℃

Folin酚乙试剂 20ml 2-8℃BSA(5 mg/ml) 1ml -20ºCPBS 稀释液 30ml 2-8℃ Lowry法测定较为不受脂类物质干 扰，适于脂类含量较高的样品测定。也能耐受相当浓度的 去垢剂如SDS。

二、蛋白电泳

·预制胶

SDS-PAGE如今已形成成熟的方案，实验室可根据自己的情况和习惯来选择试剂。如选择1、2、3、4、5、6、7、8、9全部试剂可自己配制。也可以选择配制好的试剂。

系号 产品货号 产品名称 系号 产品货号 产品名称

1 T8060 TRIS 三羟甲基氨基甲烷 11 S1051 4XSDS-PAGE分离胶缓冲液（PH=8.8）

2 G8200 Glycine 甘氨酸 12 S1052 4XSDS-PAGE浓缩胶缓冲液（PH=6.8）

3 S8010 SDS 十二烷基硫酸钠 13 P1016 4×蛋白上样缓冲液(含β-巯基乙醇)

4 A8080 Acrylamide 丙烯酰胺 14 P1015 4×蛋白上样缓冲液(含DTT)

5 M8200 N,N-Methylene Bisacrylamide甲叉双丙烯酰胺 15 D1070 1M DTT

6 A8090 Ammonium Persulfate 过硫酸胺 16 A1030 10%过硫酸氨

7 D8220 DTT 二硫苏糖醇 17 T1020 1M Tris-HCL (PH6.8)

8 M8210 β-Mercaptoethanol β-巯基乙醇 18 T1010 1.5M Tris-HCL(PH8.8)

9 T8090 TEMED 四甲基乙二胺 19 S1010 10%SDS

10 A1010 30%丙烯酰胺（29:1） 20 T1070 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液

·制胶

凝胶配制表（一）

分离胶12% 分离胶10% 分离胶8% 浓缩胶（3%）

总体积 10ml 10ml 10ml 5ml

4X分离胶缓冲液（PH8.8） 2.5ml 2.5ml 2.5ml 0

4X浓缩胶缓冲液（PH6.8） 0 0 0 1.25ml

30%丙烯酰胺(29:1) 4ml 3.3ml 2.7ml 0.5ml

ddH2O 3.4ml 4.1ml 4.7ml 3.2ml

10%过硫酸铵 100ul 100ul 100ul 75ul

TEMED 10ul 10ul 10ul 7.5ul

凝胶配制表（二）

分离胶12% 分离胶10% 分离胶8% 浓缩胶（3%）

总体积 10ml 10ml 10ml 5ml

30%丙烯酰胺(29:1) 4ml 3.3ml 2.7ml 0.5ml

1M Tris-HCL (PH6.8) 0 0 0 0.625ml

1.5M Tris-HCL(PH8.8) 2.5ml 2.5ml 2.5ml 0

10%SDS 100ul 100ul 100ul 50ul

ddH2O 3.3ml 4.0ml 4.6ml 3.75ml

10%过硫酸铵 100ul 100ul 100ul 75ul

TEMED 10ul 10ul 10ul 7.5ul

本公司的丙烯酰胺是29：1的，如需要定制其他规格的可以联系我们。 为了客户实验方便，我们生产的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒（P1200）和Tris- Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒（P1320），后者主要用于小于10kd的蛋白和多肽的分离。包含了制胶的全部试剂，方便客户操作。 如果您想节省时间，也可以使用我们的预制胶，无需配胶，直接跑电泳即可。

·上样及电泳

本公司的上样缓冲液既有用于非变性的（P1017、p1027）又有变性的（P1015、P1016、P1017、P1018），有不同的稀释倍数，可以满足客户的多种实验需求。 电泳缓冲液既有用于普通的tris-甘氨酸缓冲系统的产品（T1070），又有用于Bis-tris这种系统的MOPS缓冲液（T1510） 蛋白marker有多种，非预染marker、预染marker、彩虹marker、Western Blot Marker。而且还有GE原装的变性非变性marker，广泛的分子量和用途供您选择。

产品货号 产品名称 产品货号 产品名称

P1015 4×蛋白上样缓冲液（含DTT） P1016 4×蛋白上样缓冲液（含β-巯基乙醇）

P1018 2×蛋白上样缓冲液（含DTT） P1019 2×蛋白上样缓冲液（含β-巯基乙醇）

P1017 4×非变性蛋白上样缓冲液 p1027 2×非变性蛋白上样缓冲液

T1070 5×Tris甘氨酸电泳缓冲液 T1510 Tris-Mops缓冲液(10×)

PR1300-15 次高分子量蛋白质标准 15T PR1400-20 低分子量蛋白质标准(14.4-97.4KD) 20T

PR1500-10 次高分子量蛋白质标准 10T PR1600-20 预染低分子量蛋白质(14.4-97.4KD) 20T

PR1700-10 预染次高分子量蛋白质标准 10T PR1800-10 Western Blot Marker 10T(50ul）

PR1900 预染超低分子量蛋白marker（3.3-31KD) 20T PR1910 彩虹180广谱蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)

PR1920 彩虹245广谱蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) PR1930 彩虹245plus广谱蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)

·染色

跑胶后的染色可以用银染或者考染的方法，如果蛋白量少，推荐使用灵敏度高一些的银染试剂盒（G7210），否则常规染色可以使用（P1305）和（P1300），其中P1300的优点是染色时间短，半小时内即可检测到蛋白电泳条带，节省了染色脱色的时间。

产品货号 产品名称

C8430 考马斯亮蓝R 250染色液

P1300 考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液

P1305 考马斯亮蓝染色套装

G7210